基于Tankyrase1/2靶点高通量筛选Wnt/β-catenin信号通路抑制剂

发布时间：2025-04-23 03:53

　　Wnt信号通路在进化过程中高度保守,参与调控许多极其重要的生物事件。在胚胎发育过程中,它不但决定着细胞的生长、分化,同时也调节着诸如心血管、中枢神经等重要器官的分化和形成；而在成体内,它调控干细胞的增殖和分化,控制着组织器官的自我修复和更新。Wnt信号通路的失调已被证实与多种肿瘤发生密切相关,它的异常活化可能是形成肿瘤干细胞的主要原因之一,这使其成为抗肿瘤治疗中的关键靶点。然而,由于Wnt信号通路成员很少,使针对它设计抑制剂时可选靶标有限,药物开发困难重重。近期研究发现,在结肠癌等Wnt信号异常活化的细胞中,可以通过抑制Tankyrase1/2的活性,稳定支架蛋白Axin的表达水平,从而使(3-catenin降解,抑制其调节的转录作用,进而使Wnt信号下调。Tankyrase1/2是一种端粒调控因子,它通过与TRF1结合,使端粒酶发挥功能,从而延长细胞寿命。在多种癌症中,均能检测到Tankyrase高表达,这可能是癌细胞无限增殖的主要原因之一。抑制Tankyrase1/2的活性能够同时调控上述两条信号通路,可能给治疗癌症带来新的希望。 本研究工作主要分为三个部分：首先以最新发表的Ta...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 Wnt信号通路
        1.1.1 β-catenin降解复合物的分子机制
        1.1.2 Wnt信号通路与肿瘤
        1.1.3 Wnt信号通路药物筛选现状
    1.2 端锚聚合酶结构与功能
    1.3 端锚聚合酶：全新的药物筛选靶点
    1.4 计算机辅助的虚拟筛选系统
        1.4.1 计算机辅助药物设计简介
        1.4.2 计算机辅助药物设计方法
        1.4.3 分子对接
        1.4.4 虚拟筛选技术
    1.5 基于报告基因的高通量筛选系统
第二章 材料与方法
    2.1 计算机虚拟高通量筛选
        2.1.1 所用软件及工作平台
        2.1.2 受体结构的获得
        2.1.3 小分子化合物库
        2.1.4 打分函数
        2.1.5 虚拟筛选策略及方法
    2.2 细胞水平生物活性验证
        2.2.1 化合物
        2.2.2 质粒
        2.2.3 菌株
        2.2.4 细胞
        2.2.5 相关生物试剂
        2.2.6 实验耗材
        2.2.7 主要仪器
        2.2.8 分子生物学常规方法
        2.2.9 瞬转双荧光素酶报告系统
        2.2.10 细胞增殖分析
        2.2.11 统计分析
第三章 实验结果
    3.1 计算机虚拟筛选结果
        3.1.1 基于配体相似性的筛选结果
        3.1.2 基于Tankyrase1/2靶点的大规模虚拟筛选结果
        3.1.3 小结
    3.2 细胞筛选平台构建及验证
        3.2.1 构建响应Wnt信号的pGL4.20-TCF-miniP报告系统
        3.2.2 瞬转pGL4.20-TCF-miniP的报告系统可被LiCl显著激活
        3.2.3 小结
    3.3 虚拟筛选化合物生物活性研究
        3.3.1 待试化合物对Wnt信号通路依赖的荧光报告系统的影响
        3.3.2 六种化合物对独立于Wnt通路的其他信号通路的影响
        3.3.3 六种化合物阻滞Hep-3B及DLD-1癌细胞的增殖
        3.3.4 小结
    3.4 分子对接显示化合物与TNKS 1/2 PARP结构域的相互作用
第四章 讨论
    4.1 虚拟筛选
    4.2 细胞筛选
    4.3 对接模型分析
第五章 结论
缩略词表
参考文献
在学期间的研究成果
致谢



本文编号：4041177