间充质干细胞来源的外泌体通过抑制炎症反应减缓衰老的机制研究

发布时间：2025-04-18 06:21

　　目的:衰老是由多种因素造成的一种生物现象,其特点是炎症反应增加,机体整体适应能力下降。衰老与多种器官系统性生理衰退有关,其中包括心血管系统。老年人群中,衰老相关的心血管疾病的发病率大幅度上升。在衰老过程中活性氧含量增加,因此本实验的目的就是通过在体外用H2O2处理心肌细胞,模拟体内氧化应激环境,并利用衰老鼠模型研究炎症在衰老中的作用,同时探究间充质干细胞来源的外泌体(UMSC-Exo)通过Lnc RNA MALAT1对炎症和衰老的调控作用。我们的研究将通过抑制炎症反应为减缓衰老以及治疗衰老相关的心脏疾病提供一种新的治疗策略。方法:我们选用大鼠心肌细胞系(H9C2)和衰老鼠作为研究对象。1、心肌细胞经H2O2处理后,通过检测炎症因子TNF-α,衰老基因p21的表达变化,以及通过β-半乳糖苷酶染色,研究氧化应激对心肌细胞中炎症反应和细胞衰老的影响;2、通过检测NF-κB的活性及其亚蛋白p-p65的表达变化,研究氧化应激,IKKβ的特异性抑制剂IMD-0354,si IKKβ以及UMSC-Exo对NF-κB信号通路的影响;3、对H9C2细胞进行H2O2处理前,用IMD-0354或UMSC-Ex...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
第一章 引言
第二章 材料与方法
    1 材料
        1.1 细胞系和实验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 主要抗体
        1.4 主要仪器设备
    2 实验方法
        2.1 细胞培养和传代
        2.2 细胞处理
        2.3 流式细胞术
        2.4 WesternBlot
        2.5 qRT-PCR
        2.6 细胞核质分离实验
        2.7 NF-κB启动子-荧光素酶实验
        2.8 siRNA的转染实验
        2.9 ELISA实验
        2.10 PKH26标记UMSC-Exo实验
        2.11 β-半乳糖苷酶染色实验
        2.12 成像流式细胞仪实验
        2.13 MALAT1结构预测
        2.14 p65蛋白结构预测
        2.15 动物实验
        2.16 数据分析
第三章 结果
    1 建立心肌细胞衰老模型
        1.1 心肌细胞衰老模型的建立
        1.2 衰老对炎症反应的影响
        1.3 衰老对细胞凋亡的影响
        1.4 衰老对NF-κB信号通路的影响
        1.5 衰老对总p65和p-p65s536核转移的影响
    2 IMD-0354对心肌细胞衰老的影响
        2.1 IMD-0354对心肌细胞炎症和凋亡的影响
        2.2 IMD-0354对心肌细胞衰老的影响
    3 siIKKβ对心肌细胞衰老的影响
        3.1 siIKKβ对NF-κB信号通路的影响
        3.2 siIKKβ对心肌细胞炎症和凋亡的影响
        3.3 siIKKβ对心肌细胞衰老的影响
    4 UMSC-Exo对心肌细胞衰老的影响
        4.1 UMSC-Exo对心肌细胞衰老和炎症的影响
        4.2 UMSC-Exo对心肌细胞凋亡和增殖的影响
    5 UMSC-Exo对心脏衰老的影响
        5.1 检测衰老过程中p21和TNF-α的表达
        5.2 尾静脉注射的UMSC-Exo在体内的驻留情况
        5.3 UMSC-Exo对心脏衰老的影响
        5.4 UMSC-Exo对心脏中炎症的影响
    6 UMSC-Exo中LncRNAMALAT1对细胞衰老的影响
        6.1 MALAT1在UMSC及UMSC-Exo中的表达
        6.2 MALAT1在UMSC中的亚细胞定位
        6.3 MALAT1在心肌细胞中的表达及亚细胞定位
        6.4 检测MALAT1的沉默效率
        6.5 MALAT1对细胞衰老过程中炎症的影响
        6.6 MALAT1对心肌细胞衰老的影响
        6.7 MALAT1对NF-κB信号通路的影响
    7 UMSC-Exo中LncRNAMALAT1对心脏衰老的影响
        7.1 检测衰老过程中MALAT1的表达
        7.2 MALAT1对心脏衰老和炎症的影响
        7.3 MALAT1对心脏功能的影响
    8 MALAT1调控炎症反应的机制图
第四章 讨论
第五章 结论
    1 结论
    2 创新点
    3 后续研究展望
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间公开发表论文
文中主要缩略词表
致谢



本文编号：4040672