人脂肪间充质干细胞成软骨分化的可视化研究及Wnt/β-catenin信号通路在分化中的作用及机理研究

发布时间：2025-04-11 00:30

　　目的： 间充质干细胞具有多向分化潜能，体外培养可以分化出多种组织细胞。组织工程化软骨构建需要干细胞来源的软骨样细胞，但长期培养会出现细胞“去分化”问题，这也成为制约构建组织工程化软骨发展的瓶颈。研究表明Wnt/β-catenin信号转导调控干细胞的增殖、分化与凋亡。本课题目的是通过研究细胞分化过程中内在特性的改变及Wnt/β-catenin信号通路对人脂肪间充质干细胞（humanadipose-derived stem cells, hADSCs）成软骨的调控作用及机理，探讨细胞去分化的可能原因及机制，为解决目前干细胞成软骨分化的“失稳”及构建理想组织工程化软骨修复软骨缺损提供可靠的实验依据和方法。 方法： 1、采用胶原酶I消化及贴壁培养法，从人皮下脂肪组织块中提取间充质干细胞。通过流式细胞术检测细胞表面标记物及测定细胞周期；通过化学诱导法定向诱导细胞成脂、成骨、成软骨分化，分别予以油红O染色、碱性磷酸酶染色、钙结节染色、碱性磷酸酶浓度测定和甲苯胺蓝染色进行鉴定。 2、采用经典法诱导hADSCs成软骨分化，分化的0～21天各时间点采用RealtimeRT-PCR检...

【文章页数】：144 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
前言
    1. 传统的关节软骨修复方法
        1.1 调动软骨细胞内在愈合潜能促进软骨愈合
        1.2 促进软骨细胞的再生与修复
    2. 组织工程化软骨在关节软骨修复中的应用
        2.1 自体软骨细胞
        2.2 胚胎干细胞（embryonic stem cells, ESCs）
        2.3 间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)
    3. 组织工程化软骨修复关节软骨存在的问题
    4. 原子力显微镜(Atomic force microscopy, AFM)在细胞研究中的应用
    5. Wnt/β-catenin 信号通路在干细胞分化中作用的研究
第一章 人脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定
    1. 材料与方法
    2. 结果
    3. 附图
    4. 讨论
    5. 结论
第二章 体外诱导人脂肪间充质干细胞成软骨分化的实验研究
    1. 材料与方法
    2. 结果
    3. 附图
    4. 讨论
    5. 结论
第三章 人脂肪间充质干细胞成软骨分化的可视化研究
    1. 材料与方法
    2. 结果
    3. 附图
    4. 讨论
    5. 小结
第四章 Wnt/β-catenin 信号通路在人脂肪间充质干细胞成软骨分化过程中的作用及机理研究
    第一节 Wnt/β-catenin 信号通路在 hADSCs 成软骨分化过程中的调控作用
        1.材料与方法
        2. 结果
        3. 附图
        4. 讨论
        5. 小结
    第二节 抑制 Wnt/β-catenin 信号通路对 hADSCs 成软骨分化作用的探讨
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3 附图
        4. 讨论
        5. 小结
    第三节 全程激活 Wnt/β-catenin 信号通路对 hADSCs 成软骨分化作用的探讨
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3 附图
        4 讨论
        5. 小结
    第四节 后期激活 Wnt/β-catenin 信号通路对 hADSCs 成软骨分化作用的探讨
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 附图
        4. 讨论
        5. 小结
全文总结
问题与展望
参考文献
英文缩略词
攻读博士学位期间参加科研工作情况
致谢



本文编号：4039223